ATG5通过细胞自噬调控Ⅱ型胶原表达的实验研究

作者：邓琳; 先梦麟; 杨玉有; 耿娜娜; 邝彪; 郭风劲^*

来源：陆军军医大学学报, 2023, 45(17): 1828-1837.

DOI：10.16016/j.2097-0927.202302029

• 骨关节炎
• 软骨细胞
• Ⅱ型胶原
• 细胞自噬
• ATG5

目的 探究自噬相关蛋白ATG5通过影响自噬功能调控软骨细胞中Ⅱ型胶原的表达水平。方法 GEO数据库下载13例人软骨组织样本的转录组数据分析ATG5和COL2A1表达的相关性。雷帕霉素(Rapamycin, Rapa)和巴佛洛霉素A1(Bafilomycin A1,BafA1)处理人软骨细胞C28/I2,Western blot及免疫荧光检测Ⅱ型胶原(CollagenⅡ,COL2)的表达水平。构建人源COL2A1启动子质粒，双荧光素酶报告实验检测过表达ATG5对COL2A1启动子转录活性的影响。mRFP-GFP-LC3自噬双标腺病毒动态监测过表达和敲低ATG5后自噬流的变化。Western blot检测过表达或敲低ATG5后Rapa及BafA1对COL2、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平的影响。结果 GEO数据库相关性分析结果显示在人软骨组织中ATG5和COL2A1的mRNA表达呈现正相关；Rapa和BafA1分别显著促进和抑制C28/I2细胞COL2的表达(P<0.05);成功构建人源COL2A1启动子质粒，并用双荧光素酶报告实验证实过表达ATG5上调COL2A1启动子转录活性(P<0.01);自噬双荧光病毒处理后，过表达ATG5组LC3-GFP荧光淬灭(P<0.01),自噬激活；敲低ATG5后，LC3-GFP荧光增强(P<0.05),自噬抑制；Rapa促进过表达ATG5上调的COL2和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达(P<0.05),BafA1显示与Rapa相反的作用(P<0.05)。结论 过表达ATG5上调Ⅱ型胶原的表达，且ATG5调控Ⅱ型胶原的表达依赖于细胞自噬。

• 单位
  基础医学院; 重庆医科大学附属第二医院; 重庆医科大学