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摘要
目的：观察龟鹿二仙胶含药血清对脂多糖（LPS）诱导的大鼠退变软骨细胞中蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）/真核起始因子2α(eIF2α)信号通路相关蛋白表达的影响，探讨龟鹿二仙胶治疗KOA的作用机制。方法：制备龟鹿二仙胶含药血清及空白血清。采用4周龄SD大鼠膝关节软骨提取软骨细胞并进行体外培养，用甲苯胺蓝染色法对软骨细胞进行鉴定。采用CCK-8法筛选最佳含药血清浓度进行后续实验。用10μg/mL LPS诱导F2代软骨细胞复制退变软骨细胞模型，将细胞分为空白组、模型组、龟鹿二仙胶组、PERK抑制剂组，干预24 h后，分别采用CCK-8法检测软骨细胞活性；TUNEL法检测软骨细胞凋亡情况；RT-qPCR法检测软骨细胞PERK、eIF2α、前凋亡基因C/EBP同源蛋白（CHOP）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）mRNA的表达；Western Blot检测软骨细胞p-PERK、p-eIF2α、CHOP、Bax、活化的Caspase-3(Cleaved-Caspase-3)、Bcl-2蛋白的表达情况。结果：与空白组比较，模型组软骨细胞活性显著降低（P<0.05），软骨细胞凋亡数增多，PERK、eIF2α、CHOP、Bax、Caspase-3 mRNA及p-PERK、p-eIF2α、CHOP、Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白表达量显著上调（P<0.01）,Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著下调（P<0.01）；与模型组比较，龟鹿二仙胶组和抑制剂组软骨细胞活性显著提升（P<0.05,P<0.01），软骨细胞凋亡数减少，PERK、eIF2α、CHOP、Bax、Caspase-3 mRNA及p-PERK、p-eIF2α、CHOP、Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白表达量显著下调（P<0.01）,Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著上调（P<0.01）。结论：龟鹿二仙胶含药血清能显著改善大鼠退变软骨细胞活性及细胞凋亡情况，其作用机制可能是通过调控PERK/eIF2α信号通路相关蛋白的表达水平，进而发挥了软骨保护作用。
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