GeXP多重PCR法同时检测5种致泻性大肠埃希菌

作者：陈建才; 陈鸿鹄; 张云怡; 张俊彦; 张政^*; 潘军航; 占利

来源：预防医学, 2022, 34(10): 1075-1080.

DOI：10.19485/j.cnki.issn2096-5087.2022.10.020

• GeXP系统
• 致泻性大肠埃希菌
• 毒力基因
• 多重PCR

目的 基于GeXP多重基因表达遗传分析系统，建立快速、同时检测5种致泻性大肠埃希菌的方法。方法 根据肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)、肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)、肠致病性大肠埃希菌(EPEC)、肠集聚性大肠埃希菌(EAEC)和肠出血性大肠埃希菌(EHEC)的12种毒力基因的保守序列设计特异性引物，用单组引物分别进行PCR扩增，验证单模板单引物PCR的特异性。分别以5种致泻性大肠埃希菌基因组DNA为模板，每个体系中混合12种引物进行PCR扩增，验证单模板多重PCR的特异性。采用GeXP多重PCR分别扩增106、105、104、103CFU/mL的5种致泻性大肠埃希菌混合菌悬液DNA模板，分析该方法的灵敏度。用购自超市和农贸市场的食品制作34份加标样品，采用GeXP多重PCR鉴定5种致泻性大肠埃希菌，并与多重实时荧光PCR检测试剂盒检测结果比较。结果 单模板单引物PCR产物中，12种毒力基因sth、pic、bfpB、astA、lt、escV、aggR、stx1、uidA、invE、stx2、stp扩增片段大小与设计相符，荧光信号值良好，均在25 000 A.U.以上。GeXP单模板多重PCR体系中，5种致泻性大肠埃希菌的12种毒力基因PCR产物片段大小与设计相符，特异性良好。菌液浓度为103CFU/mL时，GeXP多重PCR可同时检测出12种毒力基因，荧光信号强度良好，重复检测结果相同，变异系数<10%。采用GeXP多重PCR检测34份加标样品，检出ETEC 3株，EAEC 12株，EIEC、EPEC和EHEC各1株，与商品化的5种致泻性大肠埃希菌多重实时荧光PCR检测结果一致。结论本研究建立了一种同时检测5种致泻性大肠埃希菌12种毒力基因的GeXP多重PCR方法，可用于致泻性大肠埃希菌的临床鉴别诊断及流行病学调查研究。

• 单位
  浙江省疾病预防控制中心