细菌超广谱β-内酰胺酶耐药基因多重实时荧光PCR检测体系的建立

作者：刘林; 付英梅^*

来源：中国卫生标准管理, 2021, 12(09): 136-139.

DOI：10.3969/j.issn.1674-9316.2021.09.049

• 多重实时荧光PCR
• 多重PCR
• ESBLs
• 耐药基因
• 检测体系
• 细菌

目的建立细菌超广谱β-内酰胺酶(extended spectrum beta-lactamases,ESBLs)耐药基因多重实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)法,测定其检测的敏感性、特异性及灵敏度。方法选取70例经普通PCR和DNA测序明确其超广谱β-内酰胺酶耐药基因类型的菌株,建立改良实时荧光PCR体系,确定细菌超广谱β-内酰胺酶耐药基因blaTEM、blaSHV、blaOXA-1、blaCTX-M-1和blaCTX-M-9熔解曲线的Tm值。分别以普通多重PCR和多重实时荧光PCR,检测受检菌株中blaTEM、blaSHV、blaOXA-1、blaCTX-M-1和blaCTX-M-9基因的存在情况,对比两组中不同基因检出的阳性率,计算敏感性和特异性。选定用于灵敏度检测的菌株,以活菌计数的方式稀释细菌菌液,分别进行普通多重PCR和多重实时荧光PCR扩增,以电泳出现目的条带为阳性判定标准,将目的条带即将消失的相应浓度作为检测方法的灵敏度。结果多重实时荧光PCR法中,blaTEM、blaSHV、blaOXA-1、blaCTX-M-1和blaCTX-M-9基因的熔解曲线Tm值分别是77.5℃、94.7℃、82.8℃、91.6℃、92.6℃;这五种基因联合检测时,能同时检测出blaSHV、blaCTX-M-1、blaCTX-M-9三种基因。多重实时荧光PCR对blaSHV、blaCTX-M-1、blaCTX-M-9基因检测的特异性和敏感性均为100%,灵敏度是102 cfu/μL。结论建立了用于检测超广谱β-内酰胺酶耐药基因的多重实时荧光PCR法,与普通多重PCR相比,具有较高的灵敏度。

• 单位
  哈尔滨医科大学; 基础医学院