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摘要
为研究人类胚胎干细胞无滋养层细胞培养方法及其应用,采用Stem Cell公司无滋养层细胞培养体系培养H9细胞;然后将H9细胞转移到人源材料基质上,用化学成分确定的神经分化培养液诱导H9细胞的神经分化,检测衍生的神经前体细胞和神经细胞内相应特征蛋白的表达;并用视黄酸(RA)诱导H9细胞的一般分化,检测分化过程中一主要的内质网分子伴侣BIP蛋白的表达变化。结果显示,无滋养层细胞培养体系可以较好地支持H9细胞生长,维持良好细胞形态和H9细胞特征蛋白Oct4表达;经神经分化培养液培养并采用机械分离方法,H9细胞成功分化为神经前体细胞,表达神经前体细胞特征性蛋白Nestin,一定数量的衍生细胞已经表达神经元特征蛋白Tuj1和Map2;在RA诱导的H9细胞分化中,Oct4蛋白的表达随分化逐渐下调,而BIP的表达随分化上调,提示BIP可能参与RA诱导的H9细胞分化。上述结果提示,无滋养层细胞的培养方法为人类胚胎干细胞定向分化研究以及发育研究提供较好的平台。
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