杜仲EuCHIT1基因表达载体构建及在大肠杆菌中的表达

作者：董旋; 丁延庆; 冉昕; 赵德刚

来源：山地农业生物学报, 2016, 35(05): 9-12.

DOI：10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2016.05.002

• 杜仲
• 几丁质酶基因(EuCHIT1)
• 原核表达
• 可溶性蛋白

构建了T7启动子驱动杜仲几丁质酶基因EuCHIT1的原核表达载体pET-EuCHIT1和pMCSG-EuCHIT1,其表达产物分别含6个组氨酸(6His)标签和6个组氨酸连接的麦芽糖结合蛋白(his6-tag–maltose-binding protein,MBP)标签,分别将重组载体遗传转化大肠杆菌细胞BL21(DE3),在37℃、150 rpm条件下培养至菌液OD值为0.40.8后,转到16℃、150 rpm条件下以1 m MIPTG诱导培养12 h,表达产物经SDS-PAGE分析,p ET-EuCHIT1/BL21(DE3)表达以包涵体形式存在36.03 kD融合蛋白,pMCSG-EuCHIT1/BL21(DE3)成功表达可溶形式存在的77.21 kD融合蛋白。故可以使用pMCSG-EuCHIT1/BL21(DE3)获得可溶的融合蛋白,为之后的EuCHIT1的多克隆抗体的制备和及功能研究奠定基础。

• 单位
  贵州大学; 生命科学学院