Raf-1磷脂酸结合结构域(Raf-1-PABD)融合蛋白的表达及其对细胞内磷脂酸的示踪作用

作者：杨峰; 孙文娟; 李占亭; 杜德伟; 张永平; 孙脊峰

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2017, 33(09): 1256-1260.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.008435

• Raf-1
• 磷脂酸
• 急性肾损伤
• 败血症

目的构建示踪细胞内磷脂酸的工具。方法人Raf-1基因磷脂酸结合结构域(Raf-1-PABD)能特异性结合磷脂酸,通过PCR和酶切Raf-1-PABD序列,并连接至带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标签的载体,测序鉴定正确后,细胞转染pc DNA3.0-mito PLD-HA质粒表达线粒体磷脂酶D(mito PLD)产生大量磷脂酸,同时以Raf-1-PABD-EGFP融合蛋白结合产生的磷脂酸以示踪细胞内磷脂酸的量以及细胞内磷脂酸的改变。结果重组工具载体p EGFP-C1-Raf-1-PABD(磷脂酸结合蛋白)构建并成功表达,可示踪线粒体融合过程中磷脂酸的改变。结论成功构建了示踪细胞内磷脂酸水平的p EGFP-C1-Raf-1-PABD的载体,将其转染NIH3T3细胞进行表达,可用于细胞内线粒体中磷脂酸的示踪。

• 单位
  唐都医院; 第四军医大学