多重PCR快速鉴定分枝杆菌方法的建立

作者：尹树鹏; 言晨绮; 刘志广; 赵秀芹; 李晓琴; 李马超; 刘海灿; 楼永良; 万康林^*

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2019, 39(10).

• 多重聚合酶链反应
• 分枝杆菌
• 结核分枝杆菌
• 北京基因型

目的建立并评估一种快速鉴定分枝杆菌的多重PCR法, 为结核病的快速病原诊断提供技术手段。方法选取16S rRNA、Rv0577、RD9和mtbk20680基因, 设计特异性引物, 经条件优化, 建立多重PCR方法。对非洲分枝杆菌、牛分枝杆菌、卡介苗(BCG)菌株、7种常见的非结核分枝杆菌(NTM)、7种常见的呼吸道病原菌和甘肃省93株结核分枝杆菌(MTB)临床分离株进行检测鉴定, 评价其敏感性和特异性。结果 16S rRNA、Rv0577、RD9和mtbk20680基因产物长度分别为543 bp、786 bp、369 bp和231 bp。MTB北京基因型的4个基因均为阳性, 而非北京基因型mtbk20680基因为阴性;非洲分枝杆菌、牛分枝杆菌、BCG菌株均为16S rRNA和Rv0577阳性;7种NTM仅16S rRNA为阳性;7种呼吸道菌检测结果均为阴性。93株MTB临床分离株中鉴定为北京基因型菌株的有80株, 占86.02%, 非北京型菌株有13株, 占13.98%。该方法的特异性为100%。结论该多重PCR法可以准确鉴别分枝杆菌、结核分枝杆菌复合群(MTBC)、NTM、MTB、北京基因型与非北京基因型MTB, 具有高度的敏感性和特异性。

• 单位
  中国疾病预防控制中心传染病预防控制所; 温州医科大学; 传染病预防控制国家重点实验室