人g2型溶菌酶的多克隆抗体制备及其在睾丸中的表达分析

作者：黄鹏; 杨智昉; 谢君; 徐一新; 鲍建瑛; 曹晓娥; 张宁; 余龙

来源：免疫学杂志, 2016, 32(10): 842-847.

DOI：10.13431/j.cnki.immunol.j.20160164

• 人g2型溶菌酶
• 毕赤酵母
• 多克隆抗体
• 睾丸
• 先天性免疫

目的以真核表达的人g2型溶菌酶(human goose-type lysozyme 2,LysG2)为免疫原制备抗LysG2的兔多克隆抗体,检测LysG2在睾丸组织中的定位,为阐明其生理功能提供线索。方法对LysG2毕赤酵母GS115转化菌株进行高密度培养,甲醇诱导目的蛋白表达并通过甲壳素亲和色谱纯化,以重组蛋白为免疫原制备兔抗LysG2多克隆抗体。通过ELISA检测抗体效价后,对人体各组织、精子及精液标本进行Western印迹分析,并对人睾丸组织进行免疫组化检测。结果以毕赤酵母表达LysG2为免疫原制备的抗体具有高效价,表达谱分析表明LysG2在睾丸中有表达,在精子蛋白提取物中没有检测到其存在,在精浆中检测到了LysG2。免疫组化检测结果显示LysG2在睾丸中主要定位于间质组织的Sertoli细胞。结论本研究成功以真核表达的LysG2制备了该蛋白多克隆抗体,LysG2在睾丸Sertoli细胞有表达,并分泌到精浆中,提示LysG2可能在男性生殖系统先天性免疫中发挥作用。

• 单位
  遗传工程国家重点实验室; 复旦大学; 基础医学院; 上海健康医学院