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摘要
目的:观察电针“足三里”减轻大肠癌荷瘤小鼠5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)化疗后所致肾损伤的影响,并进一步观察对其肾组织氧化应激、炎症反应及细胞凋亡的影响。方法:将35只雄性BALB/c小鼠随机分为Control组、CT26组、5-FU组、非穴组(Sham-point,SP)和足三里(ST36)组,每组7只;除Control组外,其余4组采用CT26细胞构建皮下移植瘤模型;模型构建成功后,5-FU组、非穴组和足三里组腹腔注射5-FU注射液,剂量5 mg/mL,每3日注射一次,共21天。非穴组和足三里组小鼠在每次5-FU腹腔注射后进行电针干预操作,非穴组选取小鼠双侧“非穴”,足三里组选取小鼠双侧“足三里”穴,电针参数选用连续波,频率2 Hz,5 min,干预频次及周期同5-FU腹腔注射。实验结束后进行取材,采用HE染色法观察肾组织病理形态;采用生化分析法检测肾组织肌酐(creatinine,Cre)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;采用免疫荧光法检测肾组织核因子kappa B p65 (Nuclear factor-kappaBp65,NF-κB p65)、入核情况,并应用ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6 (Interleukin-6,IL-6)和白细胞介素-1 β (Interleukin-l β,IL-1 β)表达水平;采用TUNEL荧光试剂盒检测肾组织中细胞凋亡水平,并运用Western Blot法检测肾组织中B淋巴细胞瘤-2蛋白(B-cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)抗体、B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白(Bcl-2 Associated X Protein,Bax)、活化的半胱天冬酸酶3 (Cleaved caspase-3)、活化的半胱天冬酶9 (Cleaved caspase-9)、细胞色素C (CytC)的表达水平。结果:与正常组比较,CT26组小鼠血清Cre含量升高(P<0.01),但BUN含量的差异均不具备统计学意义(P>0.05),HE染色肾组织结构清晰,肾小球及肾小管形态正常,SOD活性降低(P<0.01),MDA含量上升但差异不具备统计学意义(P>0.05),NF-κB p65蛋白表达在肾组织细胞质中,血清中TNF-α、IL-6及IL-1 β差异不明显,并且差异不具备统计学意义(all P>0.05),免疫荧光TUNNEL结果表示无明显细胞凋亡,肾组织中Bcl-2蛋白表达略升高(P<0.05),Bax(P<0.01)、Cleaved caspase-3 (P> 0.05)、Cleaved caspase-9 (P<0.01)及Cytc (P> 0.05)皆升高;与CT26组相比,5-FU组小鼠Cre(P<0.01)、BUN (P<0.05)含量上升,肾HE见肾小球萎缩,肾小囊腔较大,肾组织中SOD活性降低(both P<0.01),MDA含量明显上升(P>0.05),NF-κB p65在细胞核中表达显著增加,血清TNF-α、IL-6、IL-1 β含量增高(both P<0.05),细胞凋亡水平显著升高,Bcl-2蛋白表达略微升高(P<0.05),而Bax (P<0.01)、Cleaved caspase-9 (P<0.01)及Cytc (P<0.05)蛋白表达显著升高;与5-FU组相比,经过电针足三里穴治疗后小鼠血清Cre及BUN含量均降低(both P<0.01),肾HE显示肾组织损伤均有所减轻,肾小囊腔减小,SOD活性显著(P<0.01),MDA含量降低(P<0.05),NF-κB p65在细胞核中表达减少,血清TNF-α (P<0.05)、IL-6(P<0.05)、IL-1 β (P<0.01)含量减少,细胞凋亡水平降低,Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.01),Bax(P<0.01)、Cleaved caspase-3(P<0.01)、Cleaved caspase-9 (P<0.01)及Cytc (P<0.05)蛋白表达进一步降低。结论:电针“足三里”可减轻大肠癌荷瘤小鼠5-FU化疗后肾损伤,其作用机制可能与调节肾脏氧化应激、减轻炎症反应和抑制细胞凋亡有关。
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