离体培养大鼠海马脑片的形态学与细胞反应性研究

作者：何志慧; 蒋莉; 陈恒胜; 张晓萍

来源：重庆医科大学学报, 2008, (05): 513-516+569.

• 大鼠
• 海马脑片
• 培养
• 神经元

目的:探索离体大鼠海马脑片培养方法,观察培养脑片的形态变化和细胞反应性。方法:选择生后6～9d的Wistar鼠,分离海马,切成400μm厚的脑片,转移至带有微孔膜插件的6孔培养板内,入37%的CO_2培养箱中进行培养。通过肉眼、倒置相差显微镜观察培养海马脑片的形态学变化;用免疫组化染色检测脑片神经细胞内Fos蛋白表达变化,以判断培养脑片有无对外界伤害性刺激的应激反应能力;用膜片钳技术检测神经细胞的电生理活动,以判断培养海马脑片的活性和生理功能。结果:(1)随着体外培养时间延长,培养脑片内神经细胞数目增多,而脑片明显变薄,至培养4周时厚度约150μm厚。(2)致癫痫样发作药物匹罗卡品作用于脑片后,导致培养海马脑片CA1区细胞内Fos蛋白表达增高。(3)利用膜片钳技术,在培养1、2、3、4周的4个时点对海马脑片CA1区锥体细胞作全细胞记录,皆记录到细胞电流变化图形。结论:本方法在体外培养的海马脑片至少可存活4周,且具备良好的活性和一定的生理功能。

• 单位
  神经内科; 重庆医科大学附属儿童医院