人纤溶酶原丝氨酸蛋白酶(SP)活性区基因的克隆、表达与功能研究

作者：崔佳; 万翠香

来源：山西医科大学学报, 2015, 46(10): 982-985.

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2015.10.008

• 人纤溶酶原
• 丝氨酸蛋白酶(SP)
• 活性区
• μplg
• 质粒构建

目的克隆和表达人纤溶酶原(plasminogen,Plg)的丝氨酸蛋白酶(SP)活性区基因μplg,并进行重组蛋白的纯化及功能探索。方法用PCR方法从p DNR-plg质粒上扩增μplg,构建原核表达载体p ET22b(+)-μplg,IPTG诱导重组蛋白表达后复性,再经Ni+-NTA树脂亲和层析纯化,通过与双歧杆菌外膜蛋白Serpin的共孵育实验来探索μPlg的功能。结果 PCR成功扩增出了680 bp的人纤溶酶原Plg的SP区基因μplg,测序正确后与表达载体p ET22b(+)重组,重组质粒p ET22b(+)-μplg在大肠杆菌BL21中成功表达出分子量约为35 k D的μPlg蛋白质,经纯化后的蛋白纯度高达约90%以上,与Serpin蛋白共孵育后得到了二者的复合物。结论人纤溶酶原μPlg的成功克隆、表达及纯化对于研究SP区功能和与双歧杆菌的黏附作用有重要意义。

• 单位
  南昌大学食品科学与技术国家重点实验室; 长治医学院