短胶法预处理含高浓度去垢剂的蛋白样品

作者：马首智; 张涛; 翟琳辉; 孙玉琳; 徐平; 赵晓航

来源：生物工程学报, 2014, 30(09): 1446-1453.

DOI：10.13345/j.cjb.130649

• 短胶法
• 液质联用
• 蛋白质组学
• 蛋白定量

蛋白质组学研究中常使用含高浓度去垢剂的缓冲液以提高蛋白提取效率,但这种缓冲液会对下游蛋白质定量、酶解、质谱分析等步骤造成干扰。短胶法可用于含高浓度去垢剂样品的预处理,文中进一步评价了短胶法(Short gel)用于含高去垢剂的蛋白样品定量和预处理的效果。使用牛血清白蛋白作为标准蛋白分析了短胶法定量的线性范围,结果发现短胶法定量的线性范围为1-8μg,提示可对这一范围内的样品蛋白进行定量检测。对标准蛋白定量的线性度达到0.999,且重复性好,不容易受到蛋白表达模式变化的影响,结果可靠。短胶法定量的蛋白可通过胶内酶解,直接进行液相色谱-质谱联用(Liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)分析,质谱信号较好。结果提示直接用短胶法预处理含高浓度去垢剂的蛋白样品,值得在蛋白质组学研究中推广。

• 单位
  军事医学科学院; 分子肿瘤学国家重点实验室; 中国医学科学院肿瘤研究所; 中国人民解放军海军总医院; 放射医学研究所; 北京蛋白质组研究中心; 北京协和医学院