应用Tem-PCR技术同时检测3种致病菌的研究

作者：曲敏; 莫春生; 刘佳; 刘忠梅; 徐义刚; 李苏龙

来源：哈尔滨商业大学学报(自然科学版), 2016, 32(01): 33-37.

DOI：10.19492/j.cnki.1672-0946.2016.01.009

• 靶序列富集多重PCR方法
• 沙门氏菌
• 单核细胞增生李斯特氏菌
• 大肠埃希氏菌O157

应用靶序列富集多重PCR(target enriched multiplex PCR,Tem-PCR)技术建立同时检测沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157三种致病菌的高通量简易检测方法.实验分别以沙门氏菌的inv A基因、单核细胞增生李斯特氏菌的hly基因、大肠埃希氏菌O157 rfb E基因为靶基因,设计3对特异性引物,并与通用引物连接组成Tem-PCR引物,通过反应条件优化,建立了TemPCR检测方法.结果表明,建立的Tem-PCR方法特异性强,其检测灵敏度分别为沙门氏菌1.1×103CFU/m L、单核细胞增生李斯特氏菌5.6×102CFU/m L、大肠埃希氏菌O157 2.3×103CFU/m L.方法不需要优化调整各引物对的浓度,易于使用,有效地解决了传统多重PCR方法扩增效率不均衡的问题.

• 单位
  哈尔滨商业大学; 辽宁出入境检验检疫局