抗FIXa×FX双特异性抗体生物学活性分析方法的建立

作者：覃一枫; 张坤成; 方雅; 吴涛; 李国柱; 秦国宏^*

来源：山东化工, 2023, 52(23): 182-185.

DOI：10.19319/j.cnki.issn.1008-021x.2023.23.058

• 抗FIXa×FX双特异性抗体
• 生物学活性
• 凝血因子
• Human FⅧ

目的：建立抗FIXa×FX凝血因子双特异性抗体(Bispecific Antibody, BsAb)生物学活性分析方法，并对方法进行验证。方法：利用酶学显色原理，双特异性抗体作为桥连因子其Fab端分别连接凝血因子IXa(FIXa)和X(FX),并将FX激活为FXa,催化底物显色，获得相对活性值。并对分析方法进行专属性、准确度、精密度、线性范围及方法稳定性验证。结果：抗体在该方法下存在量效关系并能够准确测定其生物学活性。该方法能够测定与Human FⅧ功能相似的抗FIXa×FX抗体的生物学活性；在60%～150%效价水平范围内，对候选抗体进行8次测定，回收率在91.41%～97.86%;各效价水平相对偏倚(RB)均在±12%范围内，相对效价理论值与实测值直线回归分析相关系数(R2)为0.996 9;各效价水平8次结果相对标准偏差(RSD)均小于10%,几何变异系数(GCV)均小于20%;对样品进行热处理后能够准确评价活性的检出能力。结论：研究建立的抗FIXa×FX的双特异性抗体生物学活性分析方法具有良好的专属性、准确性、精密度及线性范围，该法能够用于抗FIXa×FX抗体的生物学活性评价。