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摘要
目的 探究黄芩苷对脂多糖(LPS)诱导的小鼠小胶质细胞HMC3炎症反应及酪氨酸蛋白激酶2 (JAK2)/信号转导和转录启动因子3 (STAT3)信号通路的调控作用。方法 体外培养小鼠小胶质HMC3细胞,分为对照组(不做干预)、LPS组(1μg·mL-1 LPS)、实验组(1μg·mL-1 LPS+5、10、20、40μmol·L-1黄芩苷)、抑制剂组(1μg·mL-1 LPS+20μmol·L-1 JAK2/STAT3通路抑制剂AG490)、黄芩苷+Y组(1μg·mL-1 LPS+10μmol·L-1黄芩苷+20μmol·L-1 AG490)和黄芩苷+A组(1μg·mL-1 LPS+10μmol·L-1黄芩苷+0.5μmol·L-1 JAK2/STAT3通路激活剂colivelin),干预24 h。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子白细胞介素(IL)-10、IL-1 β和肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达水平;细胞计数试剂盒-8 (CCK-8)测定细胞活力;用Hoechst 33258染色法检测细胞的凋亡率;Transwell小室测定细胞的迁移能力;蛋白印迹(Wb)法测定上皮间质转化(EMT)及JAK2/STAT3通路相关蛋白表达水平。结果 与对照组相比,LPS组IL-1β、TNF-α表达水平显著升高(P<0.05),IL-10表达水平与细胞活力显著降低(P<0.05);与LPS组相比,除LPS+5组外,其余实验组IL-1β和TNF-α表达水平均显著降低(P<0.05),IL-10表达显著升高(P<0.05),而细胞活力只有LPS+5和LPS+10组显著升高(P<0.05),因此选择细胞活力提升更高且抑炎效果综合更佳的LPS+10组进行后续实验。与对照组相比,LPS组细胞E-钙粘蛋白(E-cadherin)蛋白表达水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、迁移数、N-钙粘蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤维粘连蛋白(FN)以及p-JAK2和p-STAT3蛋白表达显著升高(P<0.05);与LPS组相比,黄芩苷组和抑制剂组显著扭转了上述指标的变化(P<0.05);与黄芩苷组相比,黄芩苷+Y组细胞E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、迁移数、N-cadherin、Vimentin、FN以及p-JAK2和p-STAT3蛋白表达显著降低(P<0.05),黄芩苷+A组则显著扭转了上述指标的变化(P<0.05)。结论 黄芩苷可显著抑制LPS诱导的小鼠小胶质HMC3细胞的炎症、凋亡、迁移及EMT进程,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3通路的信号转导相关。
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