无标签NT-proBNP重组蛋白的获得及多克隆抗体的制备

作者：谌海兰; 陈曦; 徐绣宇; 谢佳瑛; 刘宇思; 赵家宁; 曾令斌; 陈特; 张雪梅; 尹一兵; 胥文春

来源：临床检验杂志, 2012, 30(11): 902-905.

DOI：10.13602/j.cnki.jcls.2012.11.017

• N末端B型钠尿肽原
• 原核表达
• 蛋白质纯化
• 多克隆抗体

目的通过原核表达,获得不带标签的NT-proBNP重组蛋白,并用其免疫新西兰大白兔,制备兔抗NT-proBNP抗体。方法从重组菌pET-32a(+)-NT-proBNP提取重组质粒,通过PCR扩增出目的 DNA片段,插入pCold TF载体,转化入大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白。经镍柱亲和纯化、HRV 3C蛋白酶酶切、镍柱亲和纯化,制备不带标签的纯蛋白质,并用临床商品化试剂盒验证其抗原性。用该蛋白质免疫新西兰大白兔制备抗体,western blot鉴定其特异性。结果成功获得高纯度的不带标签的NT-proBNP蛋白,该蛋白质能被商品化的试剂盒识别。用该蛋白质免疫新西兰大白兔成功制备出高效价高特异的抗体。结论成功制备高纯度的无标签NT-proBNP蛋白及其多克隆抗体,为NT-proBNP在临床上的广泛应用奠定了基础。

• 单位
  重庆医科大学; 重庆医科大学附属第一医院