猪流行性腹泻病毒纳米抗体融合蛋白真核表达及鉴定

作者：郭涛; 李村院; 刘开平; 李晓悦; 胡瑞瑞; 李雅心; 王小奎; 倪伟^*; 胡圣伟^*

来源：动物医学进展, 2021, 42(04): 17-21.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2021.04.004

• 猪流行性腹泻病毒
• 纳米抗体
• 融合蛋白
• 毕赤酵母
• 分泌表达

为防控猪流行性腹泻病毒(PEDV)病的流行,构建了靶向PEDV NB3-NB6-Fc纳米抗体融合蛋白的真核表达载体,并探究能否在毕赤酵母中分泌表达。通过实验室保存的pUC57-NB3-NB6-Fc质粒,成功构建分泌表达载体pPIC9K-NB3-NB6-Fc,经SacⅠ酶将其线性化并电转化入毕赤酵母GS115菌株。经过MD、梯度G418-YPD平板和PCR方法筛选多拷贝阳性重组转化子。经鉴定为阳性重组菌株用8 mL/L甲醇在29℃条件下诱导72 h,用SDS-PAGE和Western blot方法检测上清液中重组蛋白的表达情况。结果显示,成功诱导出大小为53.2 ku的分泌型重组蛋白,经Swiss-model在线预测该蛋白具有相对紧密的空间结构。成功获得pPIC9K-NB3-NB6-Fc-GS115分泌表达菌株,可为PED的预防和治疗提供材料。

• 单位
  生命科学学院; 动物科技学院; 石河子大学