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摘要
【目的】获得能特异性识别大口黑鲈弹状病毒(Micropterus salmoides rhabdovirus, MSRV)G蛋白的多克隆抗体，为后续MSRV双抗夹心法胶体金试纸条的研制提供材料。【方法】根据GenBank上MSRV G蛋白的基因序列(GenBank登录号：OK272491.1)设计扩增其胞外区的特异性引物，以感染MSRV的GS细胞的cDNA为模板，通过PCR扩增获得目的序列，双酶切后连接至pET-28a(+)表达载体构建重组质粒pET-28a-ΔG,将重组质粒转化大肠杆菌Trans5α感受态细胞。挑取测序正确的阳性克隆提取重组表达质粒pET-28a-ΔG,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，再次挑取阳性克隆，测序正确后用IPTG诱导表达。目的蛋白经Ni-NTA树脂层析柱纯化后免疫BALB/c雌性小鼠，4次免疫后眼眶采血获得抗MSRV G蛋白的多克隆抗体，最后通过ELISA、Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定多克隆抗体的效价和特异性。【结果】PCR结果显示，获得大小为1 323 bp的目的条带。SDS-PAGE结果显示，构建的重组表达质粒可高效表达目的蛋白，Ni柱纯化后获得单一目的蛋白，分子质量在48.5 ku左右，与预期相符，且纯度符合免疫原要求。ELISA结果显示，制备的多克隆抗体效价为1∶204 800。Western blotting结果显示，制备的多克隆抗体可特异性识别不同批次的MSRV G蛋白。IFA结果显示，制备的多克隆抗体能特异性识别天然状态下的G蛋白。【结论】本研究利用MSRV G蛋白的胞外区重组蛋白成功制备出能特异性识别MSRV G蛋白的多克隆抗体，为后续MSRV的免疫检测和疫苗开发奠定了基础。
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