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摘要
【目的】探究姜黄素(Cur)对玉米赤霉烯酮(ZEA)诱导猪肾上皮细胞(PK-15)氧化损伤的保护作用，并基于SIRT1/FOXO1信号通路阐明其作用机制，为姜黄素的兽医临床应用提供依据。【方法】试验分为5组：对照组、ZEA组(36.55μg·mL-1 ZEA)、Cur 6.25组(36.55μg·mL-1 ZEA+6.25μmol·L-1 Cur)、Cur 12.5组(36.55μg·mL-1 ZEA+12.5μmol·L-1 Cur)、Cur 25组(36.55μg·mL-1 ZEA+25μmol·L-1 Cur)；通过MTT法测定ZEA的半数抑制浓度和Cur对PK-15细胞的最大安全浓度；使用倒置显微镜观察PK-15细胞的形态变化；采用试剂盒检测细胞内活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)以及丙二醛(MDA)的水平；qRT-PCR检测细胞SIRT1、FOXO1、CAT、Mn-SOD的mRNA水平；Western Blot检测SIRT1、FOXO1和Acetyl-FOXO1蛋白的表达量。【结果】ZEA的IC50为36.55μg·mL-1,Cur的最大安全浓度为25μmol·L-1；与对照组相比，ZEA极显著降低PK-15细胞活力(P<0.01)，极显著提高ROS和MDA水平(P<0.01)，极显著降低SOD、CAT活性(P<0.01)；与ZEA组对比，不同浓度的Cur(6.25、12.5、25μmol·L-1)显著提高PK-15细胞的存活率(P<0.05)，改善细胞形态；极显著(P<0.01)降低ZEA诱导的ROS和MDA水平；极显著升高细胞内SOD和CAT活性(P<0.01)。qRT-PCR结果显示，与对照组相比，ZEA降低SIRT1 mRNA表达量，极显著升高FOXO1 mRNA表达量(P<0.01)，升高Mn-SOD mRNA表达量，极显著降低CAT mRNA表达量(P<0.01)。与ZEA组对比，各Cur组不同程度的升高SIRT1和CAT的mRNA表达量，极显著的降低FOXO1的mRNA表达量(P<0.01)；极显著升高Mn-SOD的mRNA表达量(P<0.01)。Western Blot结果表明，与对照组对比，ZEA显著降低SIRT1蛋白表达(P<0.05)，极显著升高Acetyl-FOXO1蛋白表达(P<0.01)；与ZEA组对比，各Cur组均极显著升高SIRT1蛋白表达(P<0.01)，极显著降低Acetyl-FOXO1蛋白表达(P<0.01)。【结论】Cur可以上调SIRT1的表达，降低FOXO1的乙酰化水平，诱导抗氧化酶Mn-SOD和CAT的表达，从而清除ROS，降低MDA水平，减轻ZEA对PK-15细胞的氧化损伤作用。
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单位动物科学学院; 福建农林大学
