发酵乳中沙门氏菌依赖解旋酶恒温基因扩增快速检测方法的建立

作者：王赞; 李献; 王慧; 许苗苗; 张捷; 刘帅; 周巍^*; 史国华^*

来源：乳业科学与技术, 2021, 44(04): 6-10.

DOI：10.15922/j.cnki.jdst.2021.04.002

• 依赖解旋酶恒温基因扩增法
• 发酵乳
• 沙门氏菌
• 快速检测
• 基础应用

建立依赖解旋酶恒温基因扩增(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)快速检测发酵乳中沙门氏菌方法。以沙门氏菌invA基因序列为目的基因,设计特异性引物,优化反应体系中UvrD解旋酶及T4 gp32添加量,建立最优反应体系。通过HDA方法直接检测发酵乳中沙门氏菌,扩增其产物后进行电泳检测,验证方法特异性。结果表明:采用HDA快速检测法检测发酵乳中沙门氏菌特异性良好,优化后反应体系体积50μL时,UvrD解旋酶添加量为0.10μg,T4 gp32添加量为5.0μg,得到与设计序列长度(304 bp)一致的扩增产物,检出限为2.6×102 CFU/g;该方法用于快速检测发酵乳中沙门氏菌能够满足检测需求,具有较高的灵敏度、易操作,可作为一种基础且快速的方法检测发酵乳中沙门氏菌。

• 单位
  河北师范大学; 河北省食品检验研究院; 生命科学学院