双链寡聚脱氧核苷酸/载体复合物在急性肺损伤肺泡巨噬细胞中的体外转染效率研究

作者：尹文; 王倩梅; 冯洋; 朱金文; 李明月; 高路

来源：创伤外科杂志, 2014, 16(06): 538-542.

• 肺损伤
• 失血性休克
• 基因
• 细胞

目的利用圈套dsODNs/载体基因技术,通过体外实验研究NF-кB decoy dsODNs/载体复合物在急性肺损伤肺泡巨噬细胞中的体外转染效率,为进一步的体内试验提供依据,从而在细胞分子水平为临床防治全血性炎症反应综合征/急性肺损伤(SIRS/ALI)筛选精确药物靶点和寻求高效合理的治疗方案提供前瞻性的实验依据。方法制备失血性休克致ALI的实验动物模型,以Lipofectamine2000为载体,对巨噬细胞分组进行dsODNs干预:对照组、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)组、Lipofectamine2000组(Lipo2000组)、NF-κB dsODNs/Lipofectamine2000组(dsODNs组)。乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测巨噬细胞(AM)毒性;观察并测定巨噬细胞的转染活性、最佳转染浓度和转染效率。结果 dsODNs/Lipofectamine2000浓度比率为1∶5,体外转染6h时,转染效率、荧光强度和细胞状态最佳,细胞毒性适中。结论 NF-кB圈套dsODNs与Lipofectamine2000在一定浓度范围内能有效提高圈套dsODNs的转染效率,并且最大限度降低各种刺激对细胞造成的损伤,为SIRS/ALI的临床防治提供了新的思路和途径,为临床治疗ALI筛选特异性的炎症治疗药物和开发临床药物确定了精确靶点。

• 单位
  西京医院; 西安交通大学; 第四军医大学; 西安市儿童医院