miR-34a-5p对ARPE-19细胞TGF-β/Smad通路相关蛋白表达及细胞增殖、迁移和上皮-间质转化的影响

作者：庄海容; 吴子东; 陈雪红; 李成军

来源：眼科新进展, 2022, 42(09): 690-694.

DOI：10.13389/j.cnki.rao.2022.0141

• 视网膜色素上皮细胞
• miR-34a-5p
• 转化生长因子通路
• 上皮-间质转化

目的 探讨miR-34a-5p对ARPE-19细胞TGF-β/Smad通路相关蛋白表达及细胞增殖、迁移和上皮-间质转化(EMT)的影响。方法 将ARPE-19细胞分为4组：对照组、转化生长因子(TGF)-β1组、miR-34a-5p过表达组与复合干预组，对照组与TGF-β1组采用Lipofectamine 2000转染试剂转染对照模拟物，miR-34a-5p过表达组与复合干预组转染miR-34a-5p模拟物，培养24 h后采用无血清培养基饥饿培养12 h, TGF-β1组与miR-34a-5p过表达组均添加10 mg·L-1的TGF-β1,复合干预组添加10 mg·L-1的TGF-β1与10μmol·L-1的TGF-β通路激活剂SRI-011381,各组细胞继续培养24 h,测定细胞增殖、迁移与EMT。采用Western blot检测细胞TGF-β/Smad通路相关蛋白的表达水平，Ki67荧光染色检测细胞增殖情况，免疫荧光染色测定细胞EMT相关蛋白表达情况，划痕实验和Transwell实验测定细胞的迁移和侵袭能力。结果 与对照组相比，TGF-β1组细胞内TGF-β受体(TGF-βR)1、TGF-βR2、磷酸化Smad2(p-Smad2)和p-Smad3的表达水平均增高(均为P<0.05)。与TGF-β1组相比，过表达miR-34a-5p能够明显逆转TGF-β1对TGF-β/Smad信号通路的激活作用。与miR-34a-5p过表达组相比，复合干预组细胞内TGF-β/Smad信号通路明显被激活。与TGF-β1组相比，miR-34a-5p过表达组细胞Ki67阳性率为(6.67±1.52)%,明显降低(P<0.05)。与miR-34a-5p过表达组相比，复合干预组细胞Ki67阳性率为(16.67±1.53)%,显著升高(P<0.05)。划痕实验和Transwell实验结果显示：与对照组相比，TGF-β1能够促进ARPE-19细胞迁移和侵袭。过表达miR-34a-5p能够明显抑制TGF-β1组ARPE-19细胞的迁移和侵袭能力。在复合干预组内，TGF-β通路激活剂SRI-011381能够明显逆转过表达miR-34a-5p对ARPE-19细胞迁移能力的抑制作用。免疫荧光染色结果显示：与对照组相比，TGF-β1能够明显提高ARPE-19细胞内α-SMA和纤维连接蛋白表达水平，并抑制钙黏蛋白E的表达。与TGF-β1组相比，过表达miR-34a-5p能够明显抑制ARPE-19细胞发生EMT。在复合干预组内，TGF-β通路激活剂SRI-011381能够缓解过表达miR-34a-5p对ARPE-19细胞EMT的抑制作用。结论 miR-34a-5p通过靶向失活TGF-β/Smad信号通路抑制ARPE-19细胞的增殖、迁移与EMT。

• 单位
  海南医学院第二附属医院