新型冠状病毒S蛋白RBD的糖基化及其长度对蛋白疫苗免疫原性的影响

作者：张婷; 王志荣; 许雪梅^*

来源：基础医学与临床, 2020, 40(12): 1645-1650.

DOI：10.16352/j.issn.1001-6325.2020.12.009

• 新型冠状病毒
• 受体结合结构域
• 糖基化

目的分析去糖基化及片段长度对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)受体结合结构域(RBD)三聚体蛋白免疫原性的影响。方法以SARS-CoV-2 S蛋白的RBD为基础,分别突变敲除长度为220个氨基酸的RBD(aa.331-550)中的3个N-糖基化残基(N331、N343、N360),并分别在C端融合三聚化结构域,利用杆状病毒-昆虫细胞表达3个去糖基化的三聚体蛋白(RBDT-N1、RBDT-N2、RBDT-N3);同时构建表达2种糖基化位点不变的三聚体蛋白,即去糖基化蛋白的野生型对照RBDT和长度为273个氨基酸的RBDST(aa.319-591)。Western blot比较蛋白表达水平,亲和层析纯化后免疫小鼠,分析血清中RBD特异性IgG及SARS-CoV-2假病毒中和抗体水平。结果 RBDT-N1、RBDT-N2及RBDT-N3的表达水平均较RBDT显著提高,3种去糖基化蛋白诱发的特异性IgG及假病毒中和抗体水平均与RBDT的相当;RBDST诱发的特异性IgG抗体及假病毒中和抗体滴度较RBDT的显著提高(P<0.05,P<0.01)。结论去除RBD的N-糖基化残基及适当延长RBD旁侧序列有利于提高RBD蛋白疫苗的表达水平及免疫原性,研究结果为以RBD为基础的SARS-CoV-2疫苗的研发策略提供了参考。

• 单位
  中国医学科学院基础医学研究所; 北京协和医学院