摘要

目的:探究氨基酸转运蛋白LAT4调控髓系白血病细胞自噬的机制。方法:通过RNAi技术敲低HL-60细胞中LAT4的表达,CCK-8检测细胞体外增殖能力的变化,免疫荧光检测自噬标志物LC3Ⅱ的表达变化。Western Blot检测给予LAT4抑制剂BCH梯度浓度抑制后细胞内自噬相关蛋白的表达差异。谷氨酰胺剥夺诱导自噬后加入最适剂量BCH抑制LAT4,采用液滴计数仪检测细胞对3H-Leucine摄取率的变化。结果:干扰LAT4表达能显著降低HL-60细胞体外增殖能力并促进自噬蛋白LC3Ⅱ的表达。BCH梯度抑制LAT4活性后LAT4和pS6K蛋白表达受到显著抑制,LC3Ⅱ蛋白表达量增加,50μmol/L BCH的LAT4活性抑制效果最佳。3H-Leucine摄取率随BCH抑制LAT4时间增加而降低,BCH作用8 h后3H-Leucine摄取率分别较0 h、4 h降低47. 64%和27. 05%(P <0. 001)。结论:LAT4通过转运亮氨酸激活HL-60细胞内p S6K表达,抑制自噬发生。

  • 单位
    新疆医科大学第一附属医院