赤芝LS基因酵母单杂交文库构建及其上游调控因子的筛选

作者：徐晓兰; 朱风丽; 赖荣才; 石林春; 陈士林^*

来源：中国中药杂志, 2019, 44(18): 3967-3973.

DOI：10.19540/j.cnki.cjcmm.20190730.102

• LS
• 灵芝三萜
• 酵母单杂交
• 调控因子

赤芝羊毛甾醇合酶(lanosterol synthase,LS)是灵芝三萜生物合成甲羟戊酸途径(mevalonate pathway,MVA途径)中生成前体化合物——羊毛甾醇的关键酶,LS基因的转录调控可直接影响灵芝三萜含量的高低。为了进一步研究赤芝MVA途径关键酶基因的转录调控机制,该研究利用酵母单杂交技术,筛选出赤芝LS基因上游的转录调控因子。提取赤芝全基因组DNA,PCR扩增LS启动子序列。由LS启动子构建诱饵载体,转化Y1H酵母感受态细胞构建诱饵菌株。运用SMART技术构建灵芝酵母单杂交c DNA文库,再共转化诱饵菌株,经同源重组筛选LS基因上游的转录调控因子。该实验共筛选出23个阳性克隆,经测序后与全基因组序数据库行blast比对,筛选出LS基因上游的候选调控因子8个,包括转录起始因子TFIIB,α/β折叠水解酶超家族、醛脱氢酶超家族、60S核糖体蛋白L21,ATP合成酶β亚基、微管结合蛋白Cript、蛋白酶体亚基β-1和转醛醇酶。这8个调控因子在灵芝三萜生物合成路径中的调控作用尚未见报道,该研究为深入研究LS基因的表达调控机制提供了候选蛋白。

• 单位
  中国医学科学院药用植物研究所; 中国中医科学院中药研究所; 福建农林大学