诺如病毒基因工程疫苗中残余宿主DNA实时荧光定量PCR检测方法的建立及验证

作者：姜英; 雷清; 张巧玲; 陈继军; 杨俊杰^*

来源：中国生物制品学杂志, 2020, 33(12): 1426-1430.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003226

• 残余宿主DNA
• 实时荧光定量PCR
• 重组诺如病毒VLP疫苗
• 汉逊酵母

目的建立汉逊酵母表达的重组诺如病毒基因工程疫苗中残余宿主DNA实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测方法,并进行验证。方法采用磁珠法提取汉逊酵母基因组DNA,获得标准品,建立q PCR标准曲线,并进行专属性、线性、准确度、精密度和耐用性验证。结果专属性验证结果显示,与对照制剂(注射用水、缓冲液、Vero细胞和CHO细胞培养上清DNA)相比,建立的方法对汉逊酵母DNA具有特异性扩增曲线;线性验证中5次试验标准曲线相关系数(R2)均> 0.98;准确度验证试验不同浓度样品的加标回收率在95.12%～105.72%之间,均在70%～130%范围内;重复性和中间精密度验证试验相对标准偏差(RSD)均小于30%;耐用性验证中,Proteinase K不同消化温度下检测结果的RSD为20.75%,不同蛋白浓度供试品检测结果的RSD为27.11%,均符合《中国药典》三部(2015版)要求。结论建立的方法专属性、线性、准确度、精密度和耐用性均符合要求,可用于检测重组诺如病毒类病毒颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗中残余宿主DNA。

• 单位
  兰州生物制品研究所