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摘要
目的通过构建甲硝唑诱导胰岛β细胞破坏的转基因斑马鱼骨丢失的动物模型,为寻找可保护胰岛β细胞的促骨形成药物提供经济便捷的平台。方法用酶切鉴定正确的重组质粒p-IsceI-INS:nfsB进行显微注射,建立胰岛β细胞转基因斑马鱼系。选用受精后30 h的转基因斑马鱼胚胎分别暴露于5,10,15μmol·L-1甲硝唑溶液中,作为甲硝唑组;同时设1%二甲亚砜溶媒作为阴性对照组,nfsB蛋白将无毒性的前体药物转变为细胞毒素,在活体直接破坏胰岛β细胞。48 h后及时更换胚胎养殖水终止甲硝唑的破坏作用,常规28.5℃下在24孔板中培养至斑马鱼颅骨形成。测定斑马鱼血糖水平,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒定量测定糖基化终产物;采用茜素红对斑马鱼骨骼进行染色,以显微检测、数码成像方法定量分析骨骼染色区域。结果与阴性对照组比较,5,10,15μmol·L-1甲硝唑组斑马鱼骨骼染色面积和累计吸光度显著减小,提示利用甲硝唑破坏胰岛β细胞构建转基因斑马鱼的骨骼矿化量和骨密度都显著降低,成功诱导斑马鱼骨丢失模型。并用该模型成功验证依替膦酸二钠防治骨质疏松的作用。结论成功构建破坏胰岛β细胞诱导转基因斑马鱼骨丢失模型,为在整体动物水平筛选可保护胰岛β细胞的促骨形成的小分子化合物和中草药提供一个新型的动物模型。
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单位广东医科大学; 解剖学教研室
