原核表达载体pOPE101-8E5的改构及单链抗体的表达鉴定

作者：许静; 刁世勇; 张磊; 徐洁; 孟磊

来源：中国生物工程杂志, 2007, (04): 18-22.

DOI：10.3969/j.issn.1671-8135.2007.04.004

• 链亲和素
• 单链抗体
• 融合蛋白
• 表达载体

利用基因重组技术将链亲和素(core-streptavidin)cDNA插入原核表达载体pOPE101-8E5的3′端,并用单链抗体scFv-C4的重链和轻链可变区cDNA取代其scFv-8E5,构建重组表达载体pOPE101-C4∷core-streptavidin。将该表达载体转化入在大肠杆菌中进行诱导表达,用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹法分析表达产物的表达量和产物活性。结果提示成功地获得一个分子量约为45kDa的scFv-C4∷core-streptavidin的融合蛋白,它可结合KG1a细胞裂解物中分子量约为60kDa、45kDa的蛋白带,且其结合功能可以通过融合蛋白中的链亲和素基因直接测定。

• 单位
  中国协和医科大学; 实验血液学国家重点实验室; 中国医学科学院