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摘要
目的评价沉默调节蛋白(SIRT1)及其相关微小RNA(miRNAs)在右美托咪定减轻糖尿病小鼠肾损伤中的作用。方法 SPF级雄性C57小鼠, 8周龄, 腹腔注射1%佐链脲菌素制备糖尿病肾损伤模型。取造模成功的小鼠30只, 采用随机数字表法分为5组(n=6):糖尿病组(D组)、糖尿病+右美托咪定组(DD组)、糖尿病+右美托咪定+EX527组(DDE组)、糖尿病+右美托咪定+miR-34a-3p-agomir组(DDH组)和糖尿病+右美托咪定+miR-34a-3p-agomirNC组(DDC)。另取正常小鼠6只作为对照组(C组)。DD组、DDE组、DDH组和DDC组腹腔注射右美托咪定40 μg/kg, 每2 h 1次, 共3次;DDH组和DDC组右美托咪定给药前72 h分别尾静脉注射miR-34a-3p-agomir、miR-34a-3p-agomirNC 2.5 nmol, 每3 d 1次, 共2次;DDE组右美托咪定给药前1 h腹腔注射SIRT1抑制剂EX527 10 mg/kg。给药结束后24 h, 检测血清IL-6、IL-18、Cr和BUN浓度;取肾组织, 检测一氧化氮(NO)及总抗氧化能力(T-AOC)含量、ROS活性, 采用Western blot法和RT-PCR法分别检测SIRT1、叉形头转录调节因子3(FoxO3a)、P53及其mRNA表达水平, RT-PCR法检测miR-217、miR-138和miR-34a表达水平。结果与C组比较, D组血清IL-6、IL-18、Cr、BUN浓度、肾组织T-AOC和NO含量、ROS活性升高, P53及其mRNA、miR-34a、miR-217和miR-138表达上调, SIRT1及其mRNA、FoxO3a及其mRNA表达下调(P<0.05)。与D组比较, DD组血清IL-6、IL-18、Cr、BUN浓度、肾组织ROS活性和NO含量降低, T-AOC含量升高, SIRT1及其mRNA、FoxO3a及其mRNA表达上调, miR-34a表达下调(P<0.05)。与DD组比较, DDE组和DDH组血清IL-6、IL-18、Cr、BUN浓度、肾组织NO含量和ROS活性升高, T-AOC含量降低, SIRT1及其mRNA、FoxO3a及其mRNA表达下调(P<0.05), DDE组P53及其mRNA、miR-217、miR-34a和miR-138表达差异无统计学意义(P>0.05), DDH组P53及其mRNA、miR-34a表达上调(P<0.05)。结论右美托咪定减轻糖尿病小鼠肾损伤的机制可能与下调miR-34a表达, 进而上调SIRT1/FoxO3表达, 降低氧化应激水平有关。
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