科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的：探索在消化道上皮源性肿瘤单细胞转录组测序(简称单细胞测序)中提高组织单细胞悬液中上皮细胞占比的方法，以改善检测样本质量。方法：分析GEO公共数据库内常见消化道上皮源性肿瘤（胃癌、结肠直肠癌及胰腺癌）单细胞转录组测序数据集中的上皮细胞组分占比。比较传统酶消化法以及酶消化后辅以上机前机械性物理吹打法（改良法）处理后单细胞悬液中上皮细胞占比和细胞活力差异。结果：分析公共数据库内数据显示，4份正常胃上皮及胃癌样本的上皮细胞占比为17.05%、6.11%、8.93%和14.66%; 2份结肠直肠癌上皮细胞占比为3.86%和16.60%;2份胰腺癌上皮细胞占比为3.22%和21.37%。对2份新鲜采集的胃癌样本，采用传统酶消化法制备单细胞悬液的细胞结团率为56.26%±1.98%和38.34%±1.26%，细胞活力检测提示活细胞占比分别为98.43%±0.56%和97.24%±0.48%；而对传统酶消化法处理后的单细胞悬液在上机前用0.33 mm规格的胰岛素注射器施以机械性吹打操作30 s，可使单细胞悬液的上皮结团率降至22.78%±1.38%和14.46%±0.92%(P均<0.000 1)；活细胞占比分别为95.16%±0.42%和93.52%±0.82%(P<0.05)。结论：在采用传统酶消化后辅以机械性物理吹打法的组织样本前处理操作，可减少上皮细胞结团，从而提高单细胞悬液中的上皮细胞占比，活细胞占比虽有小幅下降，但可满足上机要求。
- 单位
