卵巢细胞系糖脂代谢紊乱模型的构建及机制探索

作者：孙亚群; 彭庆杰; 王强强; 苏亚珊; 陈科明; 李广永; 吴际; 何瑞^*

来源：宁夏医科大学学报, 2022, 44(06): 609-615.

DOI：10.16050/j.cnki.issn1674-6309.2022.06.012

• 糖脂代谢紊乱
• CHO细胞微环境
• 细胞增殖
• 细胞凋亡

目的 通过在培养基中加入葡萄糖及油酸，模拟糖脂代谢紊乱时体内高糖高油酸微环境，建立中国仓鼠卵巢(CHO)细胞代谢紊乱模型并探究作用机制。方法 培养卵巢细胞系CHO细胞，将细胞分为4组：对照组(C组)、单独高油酸模型组(O组)、单独高糖模型组(G组)、高糖高油酸联合模型组(GO组)，采用25 mmo·L-1的葡萄糖与62.5μmo·L-1的油酸，分别诱导不同时长，选择最佳处理时间和药物处理方式，建立细胞模型，通过CCK-8检测细胞增殖水平，倒置显微镜观察模型细胞形态变化，Western blot、免疫荧光染色等方式检测半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达，通过磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)以及磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的蛋白表达，初步探索其机制。结果 HE染色可见，与C组相比，O组、G组和GO组细胞数量均减少(P均<0.05)，且细胞形态由长梭形皱缩变圆；CCK-8结果显示，高糖高油酸联合处理24 h细胞增殖水平变化最明显，且与C组相比，O组、G组和GO组在24 h时细胞增殖率均下降(P均<0.05)；对细胞蛋白进行Western blot实验，与C组相比，O组、G组和GO组CHO细胞Caspase-3蛋白表达增加，G组及GO组PCNA蛋白表达减少(P均<0.05)。细胞免疫荧光染色结果亦显示，与C组相比，GO组细胞Caspase-3的表达增加(P<0.05),PCNA表达降低(P<0.05)。与C组相比，O组、G组及GO组CHO细胞中p-AMPK蛋白表达减少，G组p-mTOR蛋白表达增加(P均<0.05)。结论 给予CHO细胞高油酸、高糖和高糖高油酸联合处理均可以导致细胞处于代谢紊乱微环境，并用作研究糖脂代谢紊乱对CHO细胞作用的体外模型。

• 单位
  宁夏医科大学; 基础医学院; 宁夏医科大学总医院