Circular RNA LPAR3通过miR-143-5p/USP14通路调控食管癌细胞糖酵解的研究

作者：查建栋; 徐志渊; 陈文琦

来源：医学分子生物学杂志, 2023, 20(4): 332-338.

DOI：10.3870/j.issn.1672-8009.2023.04.009

• 环状RNA溶血磷脂酸受体
• 微小RNA-143-5
• 泛素特异性蛋白酶14
• 食管癌
• 糖酵解

目的 探究调控食管癌细胞糖酵解的机制.方法 逆转录实时定量PCR(quantitative real-time,qRT-PCR)法分别检测环状 RNA 溶血磷脂酸受体(circular RNA lysophosphatidic acid receptor 3,CircLPAR3),微小RNA-143-5(microRNA-143-5p,miR-143-5p)和泛素特异性蛋白酶 14(ubiquitin-specific protease 14,USP14)的表达水平;使用Seahorse XF 24 细胞外通量分析仪测量细胞外酸化率(extracellular acidification rate,ECAR)和耗氧率(oxygen comsumpition rate,OCR);Western印迹法检测糖酵解途径关键酶HK2 的表达水平;使用Starbase数据库预测CircLPAR3 与miR-143-5p以及miR-143-5p与USP14 的靶向结合位点,双荧光素酶试验验证CircLPAR3 和miR-143-5p以及miR-143-5p与USP14 的靶向关系.结果 与正常人食管上皮细胞(normal human esophageal epithelial cells,Het-1A)组比较,食管癌细胞系中CircLPAR3高表达,且KYSE450 细胞系的表达最高,同时 miR-143-5p 低表达而 USP14 高表达.与 Het-1A 组比较,KYSE450 组HK2 的蛋白表达水平增加,同时细胞ECAR增加,整体糖酵解OCR减少;敲低CircLPAR3 的表达导致细胞HK2 的蛋白表达水平减少,ECAR减少,整体糖酵解OCR增加;在抑制CircLPAR3 的表达情况下,抑制miR-143-5p的表达能够部分逆转细胞的糖酵解途径;双荧光素酶实验验证了CircLPAR3 和miR-143-5p的靶向关系,以及miR-143-5p和USP14 的靶向关系.结论 CircLPAR3 能够通过调控miR-143-5p/USP14 通路调节食管癌细胞糖酵解途径.

• 单位
  香港大学深圳医院