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摘要
目的 探讨木犀草素介导蛋白激酶RNA样内质网激酶(PERK)/真核翻译启动因子2α(eIF2α)/CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)信号通路改善新生大鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)的作用及相关机制。方法 取新生SD大鼠30只,其中24只采用缺氧冷刺激法建立NEC大鼠模型,按随机数字表法分为木犀草素17.5 mg/kg组、木犀草素35 mg/kg组、木犀草素70 mg/kg组、模型组,另6只大鼠设为正常组(仅予0.1 mL 0.9%氯化钠溶液干预处理),1次/d,连续灌胃给药4 d。取大鼠小肠上皮细胞系IEC-6细胞采用脂多糖刺激法建立NEC细胞模型并分为木犀草素5 μmol/L组、10 μmol/L组、20 μmol/L组、模型组,取未经脂多糖处理的IEC-6细胞设为正常组(仅予0.9%氯化钠溶液干预处理);另取建模后的IEC-6细胞分为GSK2606414 0.5 μmol/L组、GSK2606414 1.0 μmol/L组、GSK2606414 2.0 μmol/L组、GSK2606414 4.0 μmol/L组、模型组(仅予等体积0.9%氯化钠溶液干预处理),采用噻唑蓝法筛选细胞存活率最高的药物浓度(木犀草素20 μmol/L,GSK2606414 4.0 μmol/L)作为后续实验浓度,增设木犀草素20 μmol/L+GSK2606414 4.0 μmol/L组。采用HE染色观察大鼠肠道组织病理学变化,采用原位末端转移酶标记法、ELISA法、Western blot法分别检测木犀草素对大鼠肠道组织凋亡率,大鼠肠道组织、血清及IEC-6细胞中TNF-α、IL-6水平,以及大鼠肠道组织及IEC-6细胞中PERK/eIF2α/CHOP信号通路相关因子表达水平的影响。结果 与模型组比较,木犀草素35 mg/kg组、木犀草素70 mg/kg组大鼠肠道组织损伤均有不同程度的改善,且细胞凋亡率均明显较低(均P<0.05)。与模型组比较,木犀草素35 mg/kg组、木犀草素70 mg/kg组大鼠肠道组织中TNF-α、IL-6水平明显较低(均P<0.05),木犀草素17.5 mg/kg组、木犀草素35 mg/kg组、木犀草素70 mg/kg组大鼠肠道组织中p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、CHOP表达水平以及血清中TNF-α、IL-6水平均明显较低(均P<0.05),木犀草素20 μmol/L组IEC细胞中TNF-α、IL-6以及p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、CHOP表达水平均明显较低(均P<0.05);与木犀草素20 μmol/L组比较,木犀草素20 μmol/L+GSK2606414 4.0 μmol/L组IEC-6细胞中p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、CHOP表达水平均明显较低(均P<0.05)。结论 木犀草素可有效改善新生大鼠NEC,其作用机制可能与下调TNF-α、IL-6以及p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、CHOP表达水平进而抑制炎症反应有关。
