德谷胰岛素酰化修饰产物的研究与检测方法建立

作者：王芳; 牛罡; 郑伟; **波; 郑枫^*

来源：药物分析杂志, 2021, 41(04): 645-654.

DOI：10.16155/j.0254-1793.2021.04.11

• 德谷胰岛素
• 脂肪酸修饰
• 修饰位点
• 修饰副产物
• 组成成分
• 反相高效液相色谱
• 质量控制
• 纯度

目的:对特定反应条件下的酰化修饰产物进行研究,利用RP-HPLC建立德谷胰岛素(IDeg)修饰产物的质控方法。方法:对德谷胰岛素酰化修饰产物进行质谱相对分子质量分析,确定重点研究的修饰副产物。制备相应修饰副产物对照品,利用Waters Acquity H-Class/Xevo G2-XS QTof系统对各对照品进行结构确认(质谱相对分子质量、肽图覆盖率)。建立德谷胰岛素修饰产物质控方法,采用Welch Ultimate XB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm,300?)色谱柱,以0.1%三氟乙酸溶液-0.1%三氟乙酸乙腈溶液为流动相,流速1.0 m L·min-1,检测波长214 nm,柱温35℃,进样量20μL。结果:确定了3种重点研究的修饰副产物IDeg-A1、IDeg-B1、IDeg-A1B29。IDeg、IDeg-A1、IDeg-B1、IDeg-A1B29相对分子质量均与理论值一致;覆盖率均为100%且修饰位点正确。对修饰未完全样品、修饰完全样品进行检测,修饰未完全样品、修饰完全样品含量分别为5.45、7.13 mg·m L-1,IDeg纯度分别为46.651%、63.325%。对建立的德谷胰岛素修饰产物质控方法进行方法学验证,IDeg质量浓度在0.20～0.75 mg·m L-1范围内与峰面积线性关系良好(R2=1.000 0,n=5),回收率范围为98.3%～100.5%(n=9);有关物质IDeg-A1、IDeg-B1、IDeg-A1B29、D30的检测下限分别为1.50、1.83、1.40、4.00μg·m L-1;定量下限分别为3.00、3.65、4.20、5.00μg·m L-1。结论:德谷胰岛素酰化修饰产物中的修饰副产物主要包括IDeg-A1、IDeg-B1、IDeg-A1B29。建立了IDeg修饰产物的质控方法,该方法准确度、精密度、专属性、耐用性良好,可用于IDeg的含量测定及纯度分析;为进行C16-谷氨酸-NHS修饰位点的专一性研究、优化修饰条件、制定质量标准提供支持。

• 单位
  北京双鹭药业股份有限公司; 中国药科大学