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摘要
【目的】分别对恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)ND6基因组中基因高度同源的儿茶酚1,2-双加氧酶基因catA1、catA2进行克隆和原核表达,并进行生物信息学分析和酶学性质比较。【方法】通过生物信息学软件对catA1和catA2进行序列分析和进化树构建,利用经典的酶切连接方法和核酸外切酶III介导的无缝连接两种方法分别对catA1和catA2进行了表达载体的构建,对表达产物的酶学性质(最适反应温度,最适反应p H,耐热性,底物特异性等)进行了研究。【结果】catA1和catA2在基因序列上相似性为73.57%,两个酶的最适反应p H均为7.4,最适反应温度分别为45℃、50℃,Km值分别为1.28、1.66μmol/L,酶活力单位分别为9.00、8.35 U/mg,两个酶对儿茶酚和4-甲基儿茶酚具有较好的反应活性,在C12O分类中属于同一类型。【结论】本研究通过两种方式成功构建了高度同源性两个基因的表达载体,对于分离高同源性基因有一定的参考意义,同时通过对ND6菌株中同工酶的酶学性质进行研究和比较,加深了对ND6萘降解机制的理解,进一步探讨了冗余降解基因存在的意义。
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单位武警后勤学院
