腺病毒介导人内皮抑素感染视网膜色素上皮细胞的可行性研究

作者：张美霞; 吴静; 辛梅; 张军军; 闫乃红; 严密

来源：眼视光学杂志, 2009, (04): 265-268.

• 视网膜色素
• 上皮细胞
• 腺病毒
• 内皮抑素类
• 感染

目的探讨以腺病毒为载体对体外培养的人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelial,hRPE)细胞进行人内皮抑素(human endostatin,hES)感染,获得高效表达hES转基因细胞的可行性。方法常规培养hRPE细胞,传代至第3～第5代后,应用携带有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的hES重组腺病毒按感染复数30进行感染。培养24h后,在荧光显微镜下计数培养的hRPE细胞的GFP表达阳性率;用免疫组织化学法观察hES在已感染hRPE细胞中的表达情况;提取hRPE细胞总RNA,采用RT-PCR技术对产物行琼脂糖凝胶电泳;用Western blot法检测感染hRPE细胞培养上清液中hES的表达水平。结果hES重组腺病毒感染后,hRPE细胞形态正常,感染后24h,GFP即呈100%表达,弥漫整个胞质;免疫组织化学法观察可见,hRPE细胞浆内呈棕黄色的阳性反应,而在感染空载腺病毒的对照组中细胞胞浆无染色;RT-PCR反应可见,细胞裂解产物中有hES阳性条带;Western blot法检测结果表明,培养上清液中有hES蛋白的表达。结论hES重组腺病毒载体能有效感染体外培养的hRPE细胞,并稳定表达hES蛋白。

• 单位
  四川大学华西医院