基因对神经母细胞瘤细胞侵袭、迁移及耐药能力的影响

作者：李建华; 刘玉峰^*; 王家勤; 郭学鹏

来源：中华实用儿科临床杂志, 2016, 31(08): 616-619.

• DDX1基因
• 神经母细胞瘤
• 侵袭
• 迁移
• 耐药

目的探讨dead box 1(DDX1)基因对神经母细胞瘤(NB)细胞侵袭、迁移及耐药能力的影响。方法根据病毒滴度在2孔细胞中分别加入适宜量的目的病毒(Lenti-DDX1-MIR病毒液,滴度1012 TU/L)和阴性对照病毒(Lenti-EGFP病毒液,滴度3×1011 TU/L)[感染复数(MOI)=10]。将生长状态良好、处于对数生长期的空细胞[SK-N-BE(2)/blank]、阴性对照组细胞[SK-N-BE(2)/shV]和干扰DDX1组[SK-N-BE(2)/shDDX1]细胞进行培养。用Transwell法检测细胞侵袭能力,并用结晶紫对细胞进行染色,每个小室选取5个视野计数,取平均值计算细胞的侵袭率。用Transwell法检测细胞迁移能力,并用结晶紫对细胞进行染色,用酶标仪检测570 nm处的吸光度值,然后计算细胞迁移能力。称取50 mg顺铂,用5 mL二甲基亚砜(DMSO)溶剂溶解配制成质量浓度为10 g/L的母液备用;称取50 mg多柔比星,用PBS溶剂溶解配制成质量浓度为1 g/L的母液备用。将药物加入细胞培养板,达到终浓度,其中多柔比星终质量浓度为1.0 mg/L,顺铂终质量浓度为2.5 mg/L,药物处理24 h,然后拍照记录。CCK-8检测细胞对多柔比星和顺铂的敏感性变化。结果 Transwell实验结果显示,SK-N-BE(2)/shDDX1细胞侵袭的细胞量只有SK-N-BE(2)/blank及SK-N-BE(2)/shV细胞的60%;结晶紫染色显示,SK-N-BE(2)/shDDX1细胞的侵袭能力弱于SK-N-BE(2)/blank细胞及SK-N-BE(2)/shV细胞的侵袭能力,即DDX1敲减后SK-N-BE(2)细胞的侵袭能力减弱。Transwell实验结果显示,SK-N-BE(2)/shDDX1细胞的迁移能力只有SK-N-BE(2)/blank及SK-N-BE(2)/shV细胞的50%;结晶紫染色显示,SK-N-BE(2)/shDDX1细胞的迁移能力弱于SK-N-BE(2)/blank细胞及SK-N-BE(2)/shV细胞的迁移能力,即DDX1敲减后SK-N-BE(2)细胞的迁移能力减弱。DDX1基因敲减后,1.0 mg/L的多柔比星对SK-N-BE(2)/shDDX1细胞24 h的抑制率为SK-N-BE(2)/shV细胞的1.93倍,2.5 mg/L的顺铂对SK-N-BE(2)/shDDX1细胞24 h的抑制率为SK-N-BE(2)/shV细胞的1.38倍。DDX1基因表达降低能显著提高NB细胞对顺铂和多柔比星的药物敏感性。结论 DDX1的表达受到抑制后,NB细胞侵袭、迁移能力均减弱,NB细胞对多柔比星和顺铂的药物敏感性增加,NB细胞的耐药能力减弱。

• 单位
  郑州大学第一附属医院; 新乡医学院第三附属医院