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摘要
目的淋巴管上皮细胞(LECs)是胆管癌微环境中参与淋巴转移的重要环节。文中检测胆管癌细胞刺激后LECs分泌炎症因子及趋化因子的调变情况,观察高表达因子对淋巴管生成的影响。方法制备胆管癌细胞(RBE、HCCC9810)、胆管癌细胞条件培养基(CCM)刺激后的LECs、正常LECs的条件培养基,通过蛋白芯片检测各样品中炎症因子与趋化因子的分泌情况。确定在CCM刺激后LECs培养上清中显著调高的因子,通过ELISA检测,确定目标因子含量与时间的关系。实验分空白对照组:由DMEM和ECM按浓度1∶1配置;CCM组:培养基由第48小时收集的CCM和ECM按浓度1∶1配置;CCM+Anti-ENA-78组:在CCM组培养基制备基础上加入1μg/mL上皮中性粒细胞活化肽-78(ENA-78)中和抗体;Anti-ENA-78组:在空白对照组的基础上加入1μg/mL ENA-78中和抗体;ENA-78组:在空白对照组培养基制备基础上加入20 ng/mL的ENA-78活性蛋白;ENA-78+SB225002组:在ENA-78组培养基制备基础上加入100 nmol/L SB225002;SB225002组:在空白对照组培养基制备基础上加入100 nmol/LSB225002。通过细胞增殖和淋巴管成管实验探索目标因子与淋巴管生成的关系。结果 ENA-78、IP-10、GCP-2、MCP-2、MCP-3、MIP-3a、HCC-1、Lymphotactin在CCM刺激后的LECs上清中表达增高,其中ENA-78在CCM-LECs中调变程度最显著。I-TAC、MIP-1d、IL-10、MIG、PDGF-BB、CXCL16因子呈现表达下调。ENA-78蛋白在RBE-LECs、HCCC9810-LECs上清中浓度[(1190.94±120.64、1650.38±103.76)pg/mL]较正常LECs[(354.03±32.50) pg/mL]中富集(P<0.01)。CCM组和CCM+Anti-ENA-78组LECs增殖(1.19±0.14、0.59±0.07)较对照组(0.31±0.03)显著增强(P<0.05);CCM+Anti-ENA-78组较Anti-ENA-78组的增殖明显增强(P<0.05);但CCM+Anti-ENA-78组增殖较CCM组有明显减弱(P<0.01)。CCM组和CCM+Anti-ENA-78组LECs淋巴管成管数(27.67±5.73、7.67±1.25)较对照组(3.00±0.82)显著增强(P<0.05);CCM+Anti-ENA-78组较Anti-ENA-78组成管能力均有明显增强(P<0.05);但CCM+Anti-ENA-78组成管能力较CCM组有明显减弱(P<0.01)。ENA-78组的细胞增殖和成管能力均较空白对照组显著增加(P<0.05)。ENA-78+SB225002增殖和成管能力较ENA-78组有明显减弱(P<0.05)。结论胆管癌诱导淋巴管上皮细胞分泌增加的ENA-78可能通过IL-8B受体发挥促进淋巴管生成的作用。
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单位南京医科大学第二附属医院
