云南省部分地区猪圆环病毒2型的分离鉴定与进化分析

作者：李枝兰; 何帅; 张敬寒; 陶杰; 邹丰才; 张以芳^*; 柴俊^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2021, (21): 74-153.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2021.03.0264

• 猪圆环病毒2型
• 云南省
• 分离
• 鉴定
• 基因
• 进化分析

为了了解云南省部分地区猪圆环病毒2型(PCV-2)的基因型,试验采用PCR方法检测了从养殖场采集的临床症状表现为疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的组织病料,阳性病料经无菌处理后接种于PK-15细胞进行病毒分离培养,病毒液经PCR扩增、克隆和测序后进行间接免疫荧光检测,利用DNAStar软件比较分析全基因和ORF2基因序列,用MEGA 6.0软件绘制遗传进化树,MegAlign软件比较分析氨基酸序列,按照Karber法计算TCID50。结果表明:试验成功分离到2株分离株,分别命名为DH-202005和WS-202009;2株分离株的目的片段大小约为549 bp,全基因大小约为1 767 bp;感染2株分离株的PK-15细胞均可观察到特异性绿色荧光;2株分离株的全基因序列同源性为99.9%,与GenBank中不同国家和地区的22株PCV-2分离株的同源性为92.6%～99.8%,与疫苗株SH(HM038027)和LG(HM038034)的同源性分别为95.6%和95.5%;2株分离株的ORF2基因序列的同源性为99.9%,与GenBank中不同国家和地区的22株PCV-2分离株的同源性为84.0%～100%,与疫苗株SH(HM038027)同源性分别为94.0%和93.9%,与疫苗株LG(HM038034)的同源性分别为92.0%和91.9%;2株分离株在同一遗传进化分支上,与YN/QuJing-2018(MK405699)的遗传关系最近,都属于PCV-2d基因型;2株分离株与其他PCV-2d基因型毒株ORF2的氨基酸序列同源性较高,均编码234个氨基酸,与PCV-2a、PCV-2b基因型相比,在第234位多一个赖氨酸(K)残基,位于第86～91位点上的SNPLTV和第190～191/206/210位点上的TGID氨基酸序列都是典型的PCV-2d基因型序列;2株分离株第10代病毒的TCID50分别为1×105.0 TCID50/0.1 mL和1×104.5 TCID50/0.1 mL。说明云南省存在PCV-2d基因型的流行,且分离株与国内外其他PCV-2毒株遗传关系较近。

• 单位
  云南农业大学