溶酶体在巨噬细胞极化中的作用研究

作者：吴鹏; 田孝祥; 刘丹; 齐艳萍; 闫承慧; 韩雅玲

来源：中国现代医学杂志, 2018, 28(06): 1-8.

• 巨噬细胞
• 极化
• 溶酶体

目的探讨溶酶体在巨噬细胞极化中的作用。方法体外培养小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7,用脂多糖(LPS)100 ng/ml+伽马干扰素(IFN-γ)20 ng/ml诱导其向经典活化型(M1)极化,用白细胞介素4(IL-4)20 ng/ml诱导其向替代活化型(M2)极化,建立巨噬细胞极化模型。以未诱导细胞作为对照组。通过流式细胞术、ELISA、Western blot及实时PCR(real-time PCR)法,检测M1型及M2型巨噬细胞比例及标志物表达,验证巨噬细胞极化模型是否建立成功。通过Western blot、real-time PCR及免疫荧光染色检测M1型及M2型巨噬细胞中溶酶体标志物表达,包括溶酶体膜相关蛋白1、2(LAMP-1、LAMP-2)及溶酶体整合膜蛋白2(LIMP-2)。给予溶酶体抑制剂氯喹(chloroquine)25μmol/L刺激巨噬细胞,流式细胞术检测M1、M2型巨噬细胞比例。结果成功建立巨噬细胞极化模型。与对照组比较,溶酶体标志物(LAMP-1、LAMP-2及LIMP-2)转录及蛋白水平表达在M1型极化组中降低,而在M2型极化组中增加。溶酶体抑制剂氯喹处理可降低M2型极化比例,增加M1型极化比例。结论溶酶体参与巨噬细胞极化过程,抑制溶酶体可促进巨噬细胞向M1型极化。

• 单位
  锦州医科大学; 沈阳军区总医院