截短人胱硫醚β-合成酶的可溶性表达、纯化及活性鉴定

作者：王利群; 顾雅平; 曹利民; 汪庆; 于海燕; 奚学志; 孙培培; 沈关心

来源：华中科技大学学报(医学版), 2012, (06): 697-703.

• 胱硫醚β-合成酶
• 重组
• 可溶性蛋白
• 表达 cystathionine β-synthase
• recombinant
• soluble protein
• expression

目的构建截短人胱硫醚β-合成酶(T-hCBS)基因原核表达载体,得到可溶性的T-hCBS蛋白,为同型半胱氨酸检测试剂盒的开发打下基础。方法通过优化T-hCBS基因,克隆并构建重组表达质粒pET15b/T-hCBS,转化大肠埃希菌BL21。使用Ni 2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,再通过HiTrap脱盐柱脱盐,采用比色法检测目的蛋白活性。结果重组蛋白在大肠埃希菌中可以高效表达,产量为44mg/L,比活约1 100U/mg。15%SDS-PAGE显示其相对分子质量为45kD,与预计大小一致。表达菌体超声破碎后上清及纯化的蛋白溶液均呈现红色。结论成功克隆和表达了T-hCBS蛋白,并得到高产高酶活性...

• 单位
  常州大学; 华中科技大学同济医学院