解淀粉芽胞杆菌不同整合位点对外源碱性蛋白酶表达的影响

作者：牛馨; 张莹; 王茂军; 刘文龙; 路福平; 李玉^*

来源：生物技术通报, 2022, 38(04): 253-260.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2021-0755

• 解淀粉芽胞杆菌
• 整合位点
• 碱性蛋白酶
• 异源表达

为探究基因组上不同整合位点对外源碱性蛋白酶表达的影响，基于解淀粉芽胞杆菌TCCC 111018基因组信息，通过预测基因组上复制起始位点OriC确定了yaah基因整合位点；与此同时，通过分析6个胞外蛋白酶基因(epr、vpr、mpr、apr、bpr和nprE)单独缺失后对外源碱性蛋白酶酶活力的影响，并对发酵上清液中主要分泌蛋白的分析和质谱鉴定，确定了nprE和amyE基因位置为另外两个整合位点。在确定的3个整合位点处分别整合克劳氏芽胞杆菌来源的碱性蛋白酶基因aprE，并对整合菌株的碱性蛋白酶酶活力进行对比分析，结果表明整合菌株解淀粉芽胞杆菌18-ΔY∷aprE 和18-ΔN∷aprE碱性蛋白酶酶活力分别达到784.36 U/mL和1 289.09 U/mL，分别比原始菌株提高了15%和88.9%，实时荧光定量PCR和SDS-PAGE凝胶电泳表明18-ΔN∷aprE的碱性蛋白酶的转录水平和表达量均最高，这表明在nprE基因位点整合碱性蛋白酶基因可以有效提高碱性蛋白酶表达量，为进一步构建工业酶生产菌株奠定了基础。

• 单位
  工业发酵微生物教育部重点实验室; 生物工程学院; 天津科技大学