耐酸Bacillus velezensis P7木聚糖酶基因在枯草芽孢杆菌中的表达及优化

作者：黄雪芹; 左勇^*; 张强^*; 徐佳; 杨建飞; 易媛

来源：现代食品科技, 2021, 37(12): 40-32.

DOI：10.13982/j.mfst.1673-9078.2021.12.0158

• 克隆
• 枯草芽孢杆菌
• 产酶优化
• 木聚糖酶

为获得适应于酒糟酸性环境的木聚糖酶,将内源微生物耐酸性环境的野生Bacillus velezensis P7木聚糖酶基因克隆到枯草芽孢杆菌WB800中,纯化后通过SDS-PAGE电泳显示出约40 ku的蛋白多肽。为增加枯草芽孢WB800-P7工程菌株在高密度发酵中细胞外分泌木聚糖酶的产量,进行诱导和培养条件优化,用正交试验分析得出温度对产酶影响最大,确定菌株分泌重组蛋白的条件结果表明:最佳诱导条件为OD600 0.8、IPTG 1.2 mmol/L,最佳发酵条件为p H 6.0、培养温度35℃、接种量2%、摇床转速160 r/min。在该条件下发酵16 h,经重复验证,酶活力达到4.21 IU,与优化前相比,酶活力提高了64.45%。并探究重组酶的耐受性,结果表明在强酸性到中性条件下(p H 5.0～7.0),其残余酶活力达到初始酶活力的80%以上。试验成功构建了木聚糖酶工程菌并较好表达蛋白,且重组木聚糖酶在酸性条件的耐受性良好。

• 单位
  四川师范大学; 四川轻化工大学; 生物工程学院; 生命科学学院