肠道病毒71型3C蛋白酶原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定

作者：闫浩浩; 闫干干; 刘晓丽; 刘志成; 刘晓平; 陈云雨^*

来源：锦州医科大学学报, 2023, 44(03): 17-23.

DOI：10.13847/j.cnki.lnmu.2023.03.008

• 肠道病毒71型
• 3C蛋白酶
• 原核表达
• 多克隆抗体

目的 原核表达肠道病毒71型3C蛋白酶(enterovirus 71 3C protease, EV71-3Cpro)并制备其特异性多克隆抗体。方法 首先依据密码子优化原则合成EV71-3Cpro基因，将其克隆到pET-28a表达载体NdeⅠ和XhoⅠ位点间构建重组质粒，再以冷CaCl2法将其转化到大肠杆菌E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞中，优化原核表达条件。以HisTrapTM亲和层析柱进行分离纯化，以纯化的EV71-3Cpro作为抗原免疫大鼠，分离血清后以酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)、蛋白质印迹法(western blotting, WB)鉴定多克隆抗体的效价及其特异性。结果 ELISA和WB结果显示制备的大鼠抗EV71-3Cpro多克隆抗体效价达1∶1 024 000,且具有较好的特异性。结论 抗EV71-3Cpro多克隆抗体的成功制备为EV71-3Cpro生物学功能的研究及其联合疫苗的开发奠定了实验基础。

• 单位
  皖南医学院