人热休克蛋白70基因的克隆、表达及鉴定

作者：胡慧中; 柏佳宁; 张静; 何宏轩; 段明星

来源：中国生物制品学杂志, 2007, (01): 22-24+28.

DOI：10.13200/j.cjb.2007.01.27.huhzh.006

• 热休克蛋白
• 基因克隆
• 原核表达 Heat shock protein
• Gene cloning
• Prokaryotic expression

目的克隆人热休克蛋白70(HSP70)基因,构建其原核高效表达载体。方法将PCR扩增的HSP70基因克隆到原核高效表达载体pET-28b中,转化大肠杆菌JM109。挑选阳性克隆,提取质粒pE28b70F,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达目标蛋白。结果在大肠杆菌中成功表达了HSP70,表达量约占细菌总蛋白的22·3%,其中可溶性目标蛋白占上清总蛋白的12%。Westernblot表明该目标蛋白具有与鼠抗人HSP70单抗特异结合的抗原活性。通过Ni2+-NTA亲和柱,从1L诱导产物中纯化出约1520mg重组蛋白,纯度在80%以上。结论已成功表达HSP70,为进一步研究其生物学功能和...

• 单位
  中国科学院动物研究所; 膜生物学国家重点实验室; 河北师范大学; 清华大学