大鼠VGLUT2基因shRNA慢病毒载体的构建和鉴定

作者：姜俊; 高凡; 葛顺楠; 李志红; 唐君; 李金莲

来源：神经解剖学杂志, 2011, 27(06): 597-603.

• VGLUT2
• RNA干扰
• 慢病毒载体
• 原代培养神经元
• 大鼠 VGLUT2
• RNA interference
• lentiviral vectors
• primary cultured neurons
• rat

目的:构建可以表达针对2型囊泡膜谷氨酸转运体(VGLUT2)shRNA的慢病毒载体,特异性下调中枢神经系统内VGLUT2的表达,从而为研究VGLUT1和VGLUT2的功能差异提供有力的工具。方法:首先在体外合成四对互补并靶向作用于编码大鼠VGLUT2序列四个位点的特异性短发卡RNA(short hairpin RNA)序列和一个阴性对照的寡核苷酸,克隆到pGCSIL-GFP质粒(经Age I和EcoRI双酶切)载体内,经酶切及测序鉴定正确后,将该质粒与辅助质粒pHelper1.0以及pHelper2.0共转染T293细胞,包装得到病毒颗粒。各组病毒载体转染原代培养的大鼠皮层神经元后,运用免疫荧...

• 单位
  第四军医大学