水牛α1、α2、α3干扰素基因的克隆、分析及表达

作者：李小凤; 谢芝勋^*; 范晴; 谢志勤; 谢丽基; 黄娇玲; 张艳芳; 曾婷婷; 王盛; 罗思思; 李孟; 邓显文

来源：黑龙江畜牧兽医, 2021, (04): 131-141.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2020.09.0265

• 水牛
• 干扰素
• 基因克隆
• 编码区序列
• 原核表达

为了给体外研究水牛α1、α2、α3干扰素(interferon, IFN)的抗病毒作用提供试验材料,试验采用PCR技术克隆水牛IFN-α1、IFN-α2、IFN-α3编码区序列(CDS),分别采用DNAMAN、 MEGA7.0软件进行抗原肽段的预测、进化树的绘制,构建原核表达载体pET-32a-IFN-α1、pET-32a-IFN-α2、pET-32a-IFN-α3,将以上载体转入至BL21(DE3)感受态细胞中,用1.0 mmol/L IPTG分别在37,25℃下对重组菌诱导6 h,通过SDS-PAGE、Western-blot分析外源基因在大肠杆菌的表达情况。结果表明:水牛IFN-α1、IFN-α2、IFN-α3编码区序列全长分别为570,588,555 bp,分别编码189,195,184个氨基酸。水牛IFN-α1、IFN-α3与山羊IFN-α、牛IFN-αclassⅠ亲缘关系较近,与鸡IFN-α、爪蟾Ⅰ型IFN亲缘关系较远;水牛IFN-α2与牛IFN-αⅡ最近。在37℃下诱导表达,水牛IFN-α1、IFN-α2、IFN-α3重组蛋白主要以不可溶性蛋白形式存在;当其他条件不变,把诱导温度降到25℃时,重组蛋白主要以可溶性蛋白形式存在,经Western-blot鉴定为目的蛋白。说明水牛IFN-α1、IFN-α2、IFN-α3蛋白在BL21(DE3)大肠杆菌中表达成功。

• 单位
  广西壮族自治区兽医研究所