miR-2366靶向DCT基因调控香猪黑色素细胞黑色素生成的分子机制研究

作者：毕欢; 袁巍; 张雨丹; 陈伟^*

来源：南方农业学报, 2023, 1-12.

• 剑白香猪
• miR-2366
• DCT基因
• 黑色素

【目的】明确miR-2366通过靶向作用DCT基因对黑色素细胞中黑色素生成的影响，为解析剑白香猪“两头乌”毛色的形成机制奠定理论基础。【方法】利用酶解法测定剑白香猪不同毛色皮肤组织中总黑色素的含量；利用碱溶法测定不同颜色毛发中不同种类黑色素的含量；通过实时荧光定量PCR分析miR-2366和DCT基因及基因TYR、TYRP1在不同毛色皮肤组织中的表达水平；利用生物信息学网站筛选出DCT是miR-2366的靶基因之一并通过双荧光素酶检测技术验证两者之间的靶向关系；合成miR-2366 mimic、inhibitor及NC组并分别转染剑白香猪黑素细胞后，利用实时荧光定量PCR和Western blot检测DCT、TYR和TYRP1的mRNA和蛋白表达水平，同时使用碱溶法检测各转染组总黑色素的含量。【结果】在剑白香猪黑色皮肤组织中，总黑色素含量极显著高于白色皮肤组织(P＜0.01，下同)；在黑色被毛中，总黑色素、棕黑色素和真黑色素含量均极显著高于白色被毛；在黑色皮肤组织中，miR-2366的表达量极显著低于白色皮肤，而DCT、TYR、TYRP1基因的表达量极显著高于白色皮肤；双荧光素酶检测报告显示miR-2366与DCT基因有靶向关系；转染试验中，与NC组相比，miR-2366 mimic显著下调DCT、TYR和TYRP1基因的表达水平，导致黑色素的产生减少；而miR-2366 inhibitor显著上调DCT、TYR和TYRP1基因的表达水平，导致黑色素的产生增加。【结论】miR-2366通过靶向抑制DCT在黑色素细胞中的表达从而影响黑色素的生成，提示miR-2366对黑色素的生成具有调控作用，研究结果为解析剑白香猪“两头乌”毛色的形成机制奠定了理论基础。

• 单位
  贵州大学; 动物科学学院