组合型嵌合抗原受体的构建及分析鉴定

作者：林海英^*; 姚玢妍; 于艺洁; 杨扬

来源：中国生物工程杂志, 2023, 43(06): 12-19.

DOI：10.13523/j.cb.2211060

• 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3
• 上皮细胞黏附分子
• 嵌合抗原受体
• 嵌合抗原共刺激受体

目的：构建靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3,GPC3)的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor, CAR)及靶向上皮细胞黏附分子(epithelial cell adhesion molecule, EPCAM)嵌合抗原共刺激受体(chimeric antigen costimulatory receptor, CCR)共修饰的T细胞，并对其进行体外活性评估。方法：将EPCAM-CCR和GPC3-CAR基因片段克隆入慢病毒载体质粒，酶切、PCR和测序鉴定CCR+CAR pCDH重组载体。分离、激活和扩增人T细胞，利用慢病毒感染并筛选能够稳定表达该组合型嵌合抗原受体人T细胞。通过Western blot、流式细胞术(flow cytometry, FCM)验证CCR+CAR T细胞中CCR+CAR的表达，ELISA检测细胞因子IL-2、INF-γ、IL-4的分泌。结果：成功构建CCR+CAR pCDH慢病毒重组载体。成功分离、激活并扩增人T细胞。CCR+CAR pCDH慢病毒成功感染人T细胞，RT-PCR、Western blot检测也显示其成功表达目的蛋白，同时FCM分析显示CCR+CAR T细胞表面CCR+CAR的表达率为42%左右；ELISA检测CCR+CAR与表达GPC3和EPCAM的HepG2、Huh-7共培，其分泌更高水平的IL-2、INF-γ、IL-4,同时与人正常肝细胞L-02共培未发现CCR+CAR T细胞的有效激活。结论：成功获得组合型CCR+CAR T细胞，并初步探究其在肝癌细胞中的免疫效应，为后续动物体内免疫及实体瘤过继免疫治疗中防脱靶效应奠定基础。

• 单位
  福州大学